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人外周血淋巴细胞分离液引发关注和热议

2016-07-06      点击:663
 人外周血淋巴细胞分离液引发关注和热议
    人外周血淋巴细胞分离液分离方法说明及图例
    A.取1ml新鲜抗凝血,与全血及组织稀释液1:1 混匀后小心加于1份本分离液之液面上;
    B.  以500g(约1800转/分)离心25分钟(半径15cm水平转子)。
    此时离心管中由上至下细胞分四层。*层;为血浆层。第二层;为环状乳白色的白细胞层。第三层;为略带混浊的分离液层(富集一定量的白细胞)。第四层;为红细胞层。弃去*层血浆层,收集第二层细胞、第三层分离液层和第四层红细胞层,放入含细胞洗涤液10ml的试管中,充分混匀后,以500g约(1800转/分)离心30分钟。沉淀经1次洗涤后用红细胞裂解液裂解红细胞,再经3次洗涤去除红细胞内溶物和碎片后取沉淀细胞即为所需白细胞
    注:  提取率约为80%。
    人外周血淋巴细胞分离液注意事项
    A.  本人外周血淋巴细胞分离液是敏光型的,在运输和贮藏过程中应在18℃-25℃避光保存,启封后置4℃保存避免微生物污染。另外,人外周血淋巴细胞分离液为真空包装,未启封前置于10℃  以下易出现白色结晶,影响分离效果。
    B.  待分离的样本要求新鲜,避免冷冻和冷藏。人外周血淋巴细胞分离液和所分离样本一定在20℃水浴箱中复温20  分钟保证人外周血淋巴细胞分离液和所分离样本温度在20℃±2℃时分离效果zui好,且所有操作过程一定要在无菌条件下进行。
    C. 由于各品牌离心机的性能不同,国内南北地区温度环境和四季的差异,人外周血淋巴细胞分离液可能影响分离效果,用户可以调节离心转数,调节离心的时间,摸索zui佳的分离条件(具体分离条件各实验室自定)。
    D.  zui好使用无静电反应的离心管,推荐使用未经过碱处理的玻璃离心管。
    E.  zui优抗凝剂选择:EDTA、枸橼酸、肝素。人外周血淋巴细胞分离液应注意在血液稀释过程中应去除抗凝剂体积。
    人外周血淋巴细胞分离液产品性能指标
    pH  7.0-7.5
    渗透压           280-340mOsmol/kg
    内毒素                          ≤0.5EU/ml
    无菌 直接接种培养14  天后培养基澄清
    澄明度及不溶性颗粒物           每50ml  溶液中含10μm  以上的不溶性微粒20  粒以下,
    含25μm  以上的不溶性微粒5  粒以下
    人外周血淋巴细胞分离液贮藏及保存期限
    18℃-25℃避光保存,有效期两年。启封后置4℃保存,人外周血淋巴细胞分离液有效期一周。
    注:若保证无微生物污染,启封后可置4℃长期保存。人外周血淋巴细胞分离液但应注意保存温度较低时本分离液易 出现白色结晶,影响分离效果。